定性和定量检测反映病毒复制情况或水平,主要用于慢性HBV感染的诊断、血清HBV-DNA及其水平的监测以及抗病毒疗效判定.
血清HBV-DNA载量反映了病毒复制的水平.以往采用非扩增性杂交分析法检测血清HBV-DNA,但这种方法敏感性有限,定量检测的下限高达10(的5次方)-10(的6次方)拷贝/ml,因此不应继续用于慢性HBV感染者的常规检测管理.美国NIH乙型病毒性肝炎管理组推荐,若应用非扩增性杂交分析法能够测及HBV-DNA,亦即HBV-DNA>10(的5次方)拷贝/ml,应当给予抗病毒治疗.然而,部分HBeAg(+)及许多HBeAg(-)的患者,其体内的HBV-DNA具有波动性,有时可降至10(的5次方)拷贝/ml以下.而且.目前并不清楚与进展性肝病相关的HBV-DNA临界值究竟是多少.根据专家组成员的经验,即使患者血清HBV-DNA水平持续<10(的5次方)拷贝/ml,也可能存在进展性肝病.因此,HBV-DNA低水平的临床意义并不确定,应当进行个性化分析.
理想的HBV-DNA检测方法应当具有线性大动力学范围的定量能力,以允许在最低和最高病毒浓度时均能对病毒血症进行评估、目前,Roche CoBAS Tagman HBV-DNA分析系统拥有当前所能达到的最低检测下限和最广的线性定量范围.实时聚合酶链式反应(PCR)分析法的应用已越来越广泛,在对患者进行了初始病情评估时应优先选用,特别重要的是对接受和未接受抗病毒抬疗的患者进行监测.目前,在不同的监测方法之间尚缺乏标准化,因而难以对不同实验室之间的数据进行比较.这一问题有望通过建立一种标准HBV-DNA定最检测法而得以解决.将来,所有的结果都应当以mIU/ml为单位进行报告.
HBV基因分型的检测常用的方法有:①基因型特异性引物PCR法;②限制性片段长度多态性分析法(RFLP);③线性探针反向杂交法;④PCR微量板核酸杂交酶联免疫法;⑤基因序列测定法等.但目前国内尚无经国家食品药品监督管理局(SFDA)正式批准的HBV基因分型试剂盒.
HBV耐药突变株检测常用的方法有;①HBV聚合酶区基因序列分析法;②限制性片段长度多态性分析法(RFLP);③荧光实时PCR法;④线性探针反向杂交法等.
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